生物藥用蛋白制劑微粒異物檢測(cè)過(guò)程探讨

一、案例分析說明

首先我們來瞭(le)解什麽是生物藥用蛋白制劑(jì)：

生物藥用蛋白制劑是指用於(yú)預防、治療和診斷的蛋白質類物質生物藥物，比如胰島(dǎo)素、内啡肽等等，與小分子藥物相比，蛋白質藥物具有高活性、特異性強、低毒性
、有利於(yú)臨床應用的特點，具有廣闊的應用前景。

生物蛋白制劑同樣需要檢測(cè)澄清度、不溶性微粒、可見異物（參(cān)考《中國藥典2020版》）。本文通過(guò)某生物醫藥公司藥用蛋白制劑(jì)的3個(gè)檢測(cè)指标，來進行顆粒物案例分析。

二、檢測方法和結果

待檢樣品：某生物醫藥(yào)公司藥(yào)用蛋白制劑(jì)

檢測方法:依據《中國藥典2020版》0902澄清度檢查；0903不溶性微粒檢查；0904可見異物檢查。

0902 澄清度檢查

檢查目的：比較不同批次樣品的澄清度

檢查方法：中國藥典0902第一法（目視法）

儀器設備：HN-200A澄清度檢查專用傘棚燈

測試流程：

1，樣品準備(bèi)：不同編(biān)号樣品（A、B、C、D）於冰箱中取出
。

2，檢測過程：開啓HN-200A澄清度檢查傘棚燈(dēng)電源，調節白色光源旋鈕，經過标準照度計測(cè)量，将燈(dēng)光強度調節至1000 lx±10%範圍，将待測(cè)樣品置於(yú)目視窗口，人眼水平觀察。

測試結果：

圖1顯示的是不同編(biān)号蛋白制劑(jì)樣品在HN-200A澄清度檢查專用傘棚燈(dēng)下的實物照片，從(cóng)中可以看到樣品A的澄清度最差
，樣品D具有*佳的澄清度。

0903 不溶性微粒檢查

檢查目的：檢測(cè)藥用蛋白制劑(jì)中的不溶性微粒數量

檢查方法：中國藥典0903第二法（顯微計數法）

儀器設備：YH-MIP-0103顯微計(jì)數(shù)法不溶性微粒分析儀

測試流程：

1，樣品準備：取0.45μm微孔濾膜 (直徑13 mm)置於過濾裝置上，将0.4 mL待測(cè)樣品倒入過濾裝置，進行抽離過濾；過濾結束後，将濾膜轉移到培養皿中，於(yú)低溫下烘幹
。

2，檢測(cè)過(guò)程：樣品濾膜取出後放入到YH-MIP-0103顯微計(jì)數(shù)法不溶性微粒分析儀的測試台上，調整測試參數，於100倍的放大倍率下進行聚焦掃描，測(cè)試結束後得到一張包含樣品不溶性微粒的大圖以及詳細的粒子粒徑和數量報(bào)告。

測試結果：

由於測試樣品體積爲0.4 mL，故其測(cè)試結果判定标準參(cān)照《中國藥典-0903不溶性微粒檢(jiǎn)查》章節中小容量體積(jī)的标準。

表一：《中國藥典-0903不溶性微粒檢查》結果判定标準

在此章節中，藥典規定：光阻法不适用於(yú)黏度過高和易析出結晶的制劑，也不适用於(yú)進入傳感器時容易産生氣泡的注射劑。當光阻法測定結果不符合規定或者供試品不适於(yú)光阻法測定時，應採用顯微計數法進行測定，並(bìng)以顯微計數法的測定結果作爲判定依據。

測試數據:

表二：不同樣品的不同尺寸範(fàn)圍微粒的數量及判定結(jié)果

  以上A、B、C、D樣品不溶性微粒的測(cè)試結果表明該(gāi)系列樣品中的不溶性微粒檢測(cè)符合《中國藥典-0903不溶性微粒檢測(cè)》章節中的檢測(cè)标準。從(cóng)不同樣品的不溶性微粒的測(cè)試結果來看，可以看到樣品A中尺寸≥25 μm的粒子數量最多，而D樣品中尺寸≥25 μm的粒子數量最少，這與澄清度檢查章節中的測(cè)試結果具有很好的關(guān)聯性。

圖2爲樣品A的顯微計(jì)數法不溶性微粒掃描的全局圖以及部分圖，從(cóng)圖2 (b)、(c)中可以清晰地觀察到樣品制劑裏面的不溶性微粒的形狀，表明該測(cè)試結果可以作爲輔(fǔ)助手段鑒别不溶性微粒的來源。

圖2.樣品A顯微計(jì)數法不溶性微粒檢測(cè)全局圖片(a)，部分圖片 (b) (c)。

0904 可見異物檢查

檢查目的：觀察樣品制劑中的可見異物

檢查方法：中國藥典0904第一法（燈檢法）

儀器設備
：Lu -200A可見異物檢查專用傘棚燈

測試流程：

1、儀器準備(bèi)：進行可見異物檢測(cè)時應避免引入可見異物
，測(cè)試環境應爲無菌無塵環境。檢測(cè)前應對容器外壁進行擦拭，必要時将藥液轉移至潔淨透明的适宜容器中進行觀察。

2、檢測過程：打開Lu -200A可見異物檢查專用傘棚燈(dēng)，調(diào)節光源的光亮強度，配用照度計，将儀器的光強調(diào)節至1000 lx-1500 lx，将樣品置於(yú)遮光闆邊(biān)緣處，手持容器頸部，輕輕反轉以避免産生氣泡，随後進行觀察。

測試結果：

可見異物系指存在於注射劑、眼用液體制劑和無菌原料藥中，在規定條件下目視可以觀測到的不溶性物質，其尺寸大於50 μm。下表爲《中國藥典》0904章節中對於注射液無菌制劑中不溶性微粒數量的判定要求。

表三：注射用無菌制劑(jì)結(jié)果判定

圖3爲不同樣品在Lu-200A可見異物檢查專用傘棚燈下的實物圖，可以清晰地觀察到樣品溶液中存在可見異物，並且其中的可見異物數量超過藥典中的規定标準，其中樣品A中的可見異物最多，這與該系列樣品的不溶性微粒測試結果相一緻。

圖3. 不同樣品在Lu-200A可見異物檢查專用傘棚燈下的實物圖

三、 檢測總結果

經過對(duì)上述生物蛋白制劑微粒異物檢測(cè)分析可以得出以下結論：該生物蛋白質劑經過澄清度檢查、不溶性微粒檢查以及可見異物檢查之後，雖然該生物制劑的不溶性微粒檢查結果已經達到瞭(le)《中國藥典》中相關章節的檢測(cè)标準，但是其可見異物檢查觀察到的粒子數量已超過《中國藥典》中的标準規範。

以上的測試結果表明HN-200A澄清度檢查專用傘棚燈、YH-MIP-0103顯微計(jì)數(shù)法不溶性微粒分析儀、Lu-200A可見異物檢查專用傘棚燈均可對生物藥用蛋白制劑中的微粒異物進行有效的檢測(cè)，並(bìng)且三項測(cè)試得到的測(cè)試結果具有很好的一緻性，表明以上儀器均符合《中國藥典》中相關檢查的儀器要求。