AAV/LVV爲載體(tǐ)的眼用注射液的不溶性微粒檢(jiǎn)查

AAV/LVV爲載體(tǐ)的眼用注射液的不溶性微粒檢(jiǎn)查

腺病毒相關病毒（adeno-associated virus，AAV）是一類單鏈線狀DNA缺陷型病毒，有多種血清型
，且不同血清型的AAV具有不同的組織器官靶向性。通過修飾、突變(biàn)AAV的外殼蛋白序列産生新的組織傾向性的血清型。安全性高、可長期表達，治療效果持久，且易於(yú)純化，被視爲最有前途的基因轉移載體之一，在世界範圍内的基因治療和疫苗研究中得到廣泛應用。全球已有多個基因治療産品上市。

慢病毒載體（Lentivirus, LV）是細胞和基因療法常用的遞送載體之一，它的主要功能是将目的基因轉移並(bìng)整合到宿主細胞的基因組中，可以用來研究基因水平上的生物學調控機制
。作爲一種宿主範圍很廣的病毒載體，它們能夠轉導分裂和非分裂細胞，例如神經元、造血幹細胞和免疫細胞，尤其是T細胞。近年來，慢病毒轉導技術已經成功應用於(yú)CAR-T細胞的制備。

随著(zhe)AAV和LVV相關載藥技術的不斷進步，其相關制劑的不溶性微粒檢查也受到越來越多的關注，特别是基於(yú)AAV和LVV載藥技術的眼用注射液。眼用注射液作爲眼用制劑的重要方面，其不溶性微粒檢查主要是參照USP789 眼用溶液的标準。

USP789關於(yú)不溶性微粒的檢查規定瞭(le)兩種方法，第一種是光阻法，第二種是顯微計數法，但是兩種方法的判定标準是一緻的，具體詳見下圖：

本文将通過一款特殊的LVV眼用注射液對(duì)比兩種方法的一個(gè)差别：

樣品信息如下：

光阻法-不溶性微粒測(cè)試結(jié)果如下圖所示：

由上圖可以看出，大於(yú)等於(yú)10μm以上的微粒爲929.67個(gè)/ml，大於(yú)等於(yú)25μm以上的微粒爲40.67個(gè)/ml，大於(yú)等於(yú)50μm以上的微粒爲0個(gè)/ml，根據USP789光阻法判定标準，判定樣品不符合檢查的規定。

顯微計(jì)數法-不溶性微粒測(cè)試結果如下圖所示：

由上圖可以看出，大於(yú)等於(yú)10μm以上的微粒爲9個(gè)/ml，大於(yú)等於(yú)25μm以上的微粒爲3個(gè)/ml，大於(yú)等於(yú)50μm以上的微粒爲2個(gè)/ml，根據USP789顯微計數法判定标準，判定樣品符合檢查的規定。

結論
：

兩種不同的方法，測(cè)試結果確(què)實有非常大的差别，主要原因是：

1 一般眼用注射液相關制劑裝量都比較少，要滿足光阻法的檢查一般需要混合多支進行檢查，或者進行稀釋進行檢查，無論哪種方法，在制樣的過程中容易産(chǎn)生氣泡，加上體系本身少量的矽油會被當成微粒，造成很多假性的結果，因此導緻樣品測(cè)試結果不合格；

2 顯微計數法跟光阻法相比，是整支全部進行檢查，不需要考慮裝量的影響
，制備(bèi)樣品的過程中，同時可以去除氣泡和矽油等的影響，反映體系真實的不溶性微粒結果；同時可以通過觀察不溶性微粒的形貌去溯源不溶性微粒的來源，改善産(chǎn)品工藝
，提高産(chǎn)品質量。

下圖(tú)爲LVV眼用制劑(jì)中的一些特征不溶性微粒圖(tú)片：

檢查儀器如下圖所示：

胤煌科技(YinHuang Technology)是一家專注於(yú)爲醫藥、半導體及化工材料等行業提供檢測分析設備及技術服務的高科技公司，緻力於(yú)爲客戶提供全面、準確(què)的檢測分析和解決方案。主營産品包括不溶性微粒分析儀，可見異物檢查分析儀，原液粒度及Zeta電位分析儀，CHDF高精度納米粒度儀，高分辨納米粒度儀，溶液顔色測定儀，澄清度測定儀等，公司自主研發的YH-MIP系列顯微計數法不溶性微粒儀、YH-FIPS系列流式動态圖像法粒度儀，YH-FIPS系列微流成像顆粒分析儀已經在生物醫藥、半導體及材料化工領域得到廣泛應用。